微生物檢測中常用滅菌和消毒方法匯總

消毒和滅菌兩個概念有區(qū)別么？微生物檢測中常用滅菌和消毒方法匯總！

消毒和滅菌兩個詞在實際使用中常被混用，其實它們的含義是有所不同的。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法，而滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無菌狀態(tài)。

物理方法

1.溫度

利用溫度進行滅菌、消毒或防腐，是常用而又方便有效的方法。高溫可使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類發(fā)生變性而失活，從而起滅菌作用，低溫通常起抑菌作用。

1)干熱滅菌法：

a.灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)、試管口及不能用的污染物品或?qū)嶒瀯游锏氖w等的滅菌。

b.干熱空氣滅菌法：這是實驗室中常用的*種方法，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160℃，恒溫1小時即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。

2)濕熱滅菌法：

在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因為*方面細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含水量高，容易變性。另*方面高溫水蒸汽對蛋白質(zhì)有高度的穿透力，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡。

a.巴氏消毒法：有些食物會因高溫破壞營養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營養(yǎng)和風(fēng)味，又進行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法*般在62℃，30分鐘即可達到消毒目的。此法為法國微生物學(xué)家巴斯德*創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。

b.煮沸消毒法：直接將要消毒的物品放入清水中，煮沸15分鐘，即可殺死細菌的全部營養(yǎng)和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸鈉或2%的石炭酸，則效果更好。此法適用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。

c.間歇滅菌法：上述兩種方法在常壓下，只能起到消毒作用，而很難做到無菌。若采用間歇滅菌的方法，就能殺滅物品中所有的微生物。具體做法是：將待滅菌的物品加熱至100℃，15~30分鐘，殺死其中的營養(yǎng)體。然后冷卻，放入37℃恒溫箱中過夜，讓殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體。第2天再重復(fù)上述步驟，三次左右，就可達到滅菌的目的。此法不需加壓滅菌鍋，適于推廣，但操作麻煩，所需時間長。

d.加壓蒸汽滅菌法：這是發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健、食品檢測和微生物學(xué)實驗室中常用的*種滅菌方法。它適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌。

加壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在*個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進行的，以大量蒸汽使其中壓力升高。由于蒸汽壓的上升，水的沸點也隨之提高。在蒸汽壓達到1.055公斤/厘米2時，加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的溫度可達到121℃。在這種情況下，微生物（包括芽孢）在15~20分鐘便會被殺死，而達到滅菌目的。如滅菌的對象是砂土、石蠟油等面積大、含菌多、傳熱差的物品，則應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時間。

在加壓蒸汽滅菌中，要引起注意的*個問題是，在恒壓之前，*定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對應(yīng)關(guān)系，這樣會大大降低滅菌效果。

3)影響滅菌的因素：

a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營養(yǎng)體和病毒在50~65℃，10分鐘就會被殺死；但各種孢子、特別是芽孢能抗熱，其中抗熱性強的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在121℃，12分鐘才被殺死。對同種微生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感。

b.微生物的數(shù)量多少顯然會影響滅菌的效果，數(shù)量越多，熱死時間越長。

c.培養(yǎng)基的成分與組成也會影響滅菌效果。*般地講，蛋白質(zhì)、糖或脂肪存在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性強，偏向兩，則抗熱能力下降，而不同的鹽類可能對滅菌產(chǎn)生不同的影響；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時間長。

4)滅菌對培養(yǎng)基成分的影響： 

a.pH值普遍下降。

b.產(chǎn)生混濁或沉淀，這主要是由于*些離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生混濁或沉淀。例如，Ca2+與PO4-3化合，就會產(chǎn)生磷酸鈣沉淀。

c.不少培養(yǎng)基顏色加深。

d.體積和濃度有所變化。

e.營養(yǎng)成分有時受到破壞。

2.輻射

利用輻射進行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點，所以應(yīng)用越來越廣，目前主要應(yīng)用在以下幾個方面：

1）接種室、手術(shù)室、食品、藥物包裝室常應(yīng)用紫外線殺菌。

2）應(yīng)用β射線作食品表面殺菌，γ射線用于食品內(nèi)部殺菌。經(jīng)輻射后的食品，因大量微生物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期延長。

3.過濾

采用機械方法，設(shè)計*種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器。通過過濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達到除菌的目的。這種滅菌方法適用于*些對熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌。它的大優(yōu)點是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi)，有時會給實驗帶來*定的麻煩。

化學(xué)方法

*般化學(xué)藥劑無法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑。

能迅速殺滅病原微生物的藥物，稱為消毒劑。能抑制或阻止微生物生長繁殖的藥物，稱為防腐劑。但是*種化學(xué)藥物是殺菌還是抑菌，常不易嚴(yán)格區(qū)分。消毒劑在低濃度時也能殺菌（如1：1000硫柳汞）。由于消毒防腐劑沒有選擇性，因此對*切活細胞都有毒性，不僅能殺死或抑制病原微生物，而且對人體組織細胞也有損傷作用，所以只能用于體表、器械、排泄物和周圍環(huán)境的消毒。常用的化學(xué)消毒劑有：石碳酸、來蘇水（甲醛溶液）、碘酒、酒精等。

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